二甲氧基苯甲酸（DMBA）共有六种位置异构体。若采用GC法对这些异构体进行分离，则在进行色谱分离之前，通常需要先进行衍生化反应。本研究显示了在4.5分钟内对全部六种DMBA位置异构体进行基线分离所产生的结果。可采用两步梯度色谱分离来缩短总分离时间。经证明，在进行分离时，必须在流动相中加入甲酸。
图1 六种二甲氧基苯甲酸位置异构体的UPC2/UV色谱图。蓝色的数字所标示的是甲氧基的位置。
仪器与试剂
系统： 配备光电二极管阵列（PDA）检测器的 ACQUITY UPC2™
样本： 六种DMBA位置异构体的混合物，各异构体均为0.2 mg/mL的异丙醇（IPA）溶液
色谱柱： 按照客户要求定制的ACQUITY UPLC® BEH125 3.0 x 100 mm， 1.7微米
流动相A： CO2
流动相B： 含0.2%甲酸的甲醇
冲洗溶剂： IPA
分离方法：
时间（分钟） B%
0 4
0.15 4
2.75 12
4.0 25
4.35 25
4.5 4
流速： 1.2 mL/min
UPC2™管理器： 2175 psi
柱温： 60 °C
进样量： 1.0微升
运行时间： 4.5分钟
检测波长： 240nm
数据管理： Empower® 3软件
结论
超高效合相色谱（UltraPerformance Convergence ChromatographyTM）可在不进行样本衍生化的情况下，对六种DMBA位置异构体进行快速的基线分离。